При реакции глюкозы и других сахаров со свободными аминогруппами А- и В-цепей гемоглобина образуются его гликированные формы. По отрицательному заряду можно выделить только тот гемоглобин, который гликирован по N-концевому валину В-цепи. Такие формы гемоглобина носят общее название гемоглобин А, (НЬА4). Их главным компонентом является НЬА1с, в котором углевод представлен именно глюкозой. На долю этого компонента приходится 4-6% всего гемоглобина. Остальные формы HbAt содержат фруктозо-1,6-ди- фосфат (HbAlal), глюкозо-6-фосфат (НЬА1а2) и неизвестный углеводный остаток (НЬА1Ь). У больных сахарным диабетом с хронической гипергликемией фракция НЬА1с значительно повышена. В некоторых лабораториях определяют сумму всех гликогемоглобинов (HbAj), но во многих используют более специфические методы определения именно НЬА1с (электрофорез, катионообменную хроматографию, аффинную хроматографию с боронатом и иммуноферментные методы).
Результаты исследования капиллярной крови получают уже через 9 минут, что позволяет сразу же сообщить больному о качестве контроля гликемии. Поскольку гликированный гемоглобин содержится в эритроцитах, чей жизненный цикл составляет не более 120 суток, его уровень обычно отражает уровень сахара в крови за предшествующие 8-12 недель, что дает лучшее представление о качестве контроля гликемии. Доля НЬА1с определяется уровнем глюкозы за меньший промежуток времени (1 месяц) и может значительно меняться уже через этот срок. Определения HbAt следует проводить у больных сахарным диабетом любого типа с 3-4-месячными интервалами. Если его уровень оказывается ниже нормы (принятой в данной лаборатории) или на 1% превышает ее, то соответственно изменяют режим лечения. Это особенно важно в тех случаях, когда больные не пользуются методами самоконтроля концентрации глюкозы в крови.
Ошибки при измерении гликогемоглобина
Факторы, искажающие результаты хроматографического определения гликогемоглобинов
Точность измерений НЬА,С зависит от присутствия определенных вариантов или производных гемоглобина, а также от используемого метода. Так, антитела к гликированному по N-концу р-глобину не распознают концевую аминокислоту у-глобина в гемоглобине F, и поэтому у больных с повышенным уровнем гемоглобина F иммуноферментные методы занижают уровень НЬА1с. Катионообменная хроматография разделяет гемоглобины по их заряду, и поэтому варианты гемоглобина, элюирующиеся вместе с НЬА1с, завышают результаты измерений. К ним относятся модифицированные производные гемоглобина, например, карбамоилированные (при почечной недостаточности) или ацетилированные (при приеме больших доз аспирина).
Любые состояния, укорачивающие жизнь эритроцитов или снижающие их средний возраст (например, восстановление после острой кровопотери, гемолитическая анемия) занижают результаты измерений НЬА1с независимо от использованного метода. В таких случаях можно определять другие соединения (например, фруктозамины). Занижать результаты измерений могут также витамины С и Е, вероятно, препятствующие гликированию гемоглобина.
Определению НЬА, мешает отсутствие общедоступных стандартов. Национальная программа стандартизации измерений гликогемоглобина (США), начатая в 1996 г., сертифицирует применяемые для этого методы. Клинические лаборатории должны использовать только сертифицированные методы. В сертифицированных лабораториях перед хроматографией из проб удаляют обратимые альдимины (пре-НЬА1с), что позволяет проверять адекватность лечения сахарного диабета и особенно качество самоконтроля уровня глюкозы в крови. Определения гликогемоглобина не используются в диагностических целях, поскольку таким путем обычно нельзя отличить сахарный диабет от нарушения толерантности к глюкозе. Однако в тех случаях, когда этот показатель, по данным сертифицированной лаборатории, превышает нормальные колебания, диагноз сахарного диабета в высшей степени вероятен.
Фруктозамины в сыворотке
Фруктозамины образуются при неферментативном гликозилировании белков сыворотки (преимущественно альбумина). Поскольку t1/2 сывороточного альбумина гораздо меньше (14-21 сутки), чем гемоглобина, уровень фруктозамина , как правило, отражает контроль гликемии лишь за предшествующие 2 недели. Снижение концентрации альбумина в сыворотке (например, при нефрозах или заболеваниях печени) сопровождается снижением и уровня фруктозамина. Этот показатель обладает преимуществом перед уровнем гликогемоглобина в тех случаях, когда присутствие аномальных гемоглобинов или гемолиз затрудняют интерпретацию результатов измерения HbAj, а также при необходимости оценить контроль гликемии к моменту зачатия у недавно забеременевших женщин с сахарным диабетом. Нормальный уровень фруктозамина зависит от концентрации альбумина в сыворотке и, если последняя составляет 5г%, колеблется в пределах 1,5-2,4 ммоль/л. Однако в большинстве случаев сахарного диабета предпочтение следует отдавать измерению гликогемоглобина.