Гепатит С. 2 часть

•  Антитела к вирусному гепатиту С (анти-HCV), данные ИФА

Применение

Для скрининга у лиц с низким и высоким риском заболевания, в том числе у доноров.

Первоначальная оценка состояния пациента с заболеванием печени, в том числе при повышенной сывороточной АЛТ.

Интерпретация результатов

Указывают на ранее перенесенную или текущую инфекцию, но не позволяют дифференцировать острую и хроническую формы болезни или купированную инфекцию. Чувствительность метода 3s 97%, примерно 80% — у хронических вирусоносителей. Низкая ПЦПР у больных из группы малого риска.

Сероконверсия: после инфицирования в среднем 2-3 недели по ИФА-3. У 80% пациентов обнаруживают в течение 15 недель, у > 90% — в течение 5 месяцев и у > 97% в пределах 6 месяцев после инфицирования или в течение 2-3 недель после повышения АЛТ. Возможно, потребуется определение сывороточных анти-HCV и АЛТ в течение года при подозрении на острый гепатит. Отрицательные результаты ИФА исключают HCV-инфекцию у лиц из группы невысокого риска. В 30% случаев уровень инфицирования постепенно снижается, и показатель становится отрицательным. Полное исчезновение наблюдается через 10—20 лет.

Лицам с положительным ИФА следует произвести RIBA-2, и если тест отрицателен, то ИФА считается ложно-положительным; определяются в < 10% случаев. У лиц из группы высокого риска инфицирование может быть подтверждено тестом на содержание нуклеиновой кислоты HCV (например, ОТ-ПЦР и bDNA-тест, подтвержающие активную HCV-инфекцию).

Определяются в 70-80% случаев хронического посттрансфузионного гепатита С, но относительно редко в острых случаях. Присутствуют у 70% больных, получающих в/в инфузии лекарств, у 20% гемодиализных больных, у 8% гомосексуальных мужчин с положительными тестами на ВИЧ-инфекцию.

Распространенность среди здоровых доноров 0,5-2,0%. Стандартное исследование доноров крови дает 40-70% ложно-положительных первичных реакций. Стандартные маркеры не могут определить положительного результата на анти-HCV в 1/3-1/2 случаев. Обнаруживют у 7-10% реципиентов крови. Только у Щ доноров с анти-HCV определяется повышенная АЛТ и 54% положительны на анти-НВс.

В одном исследовании тест на анти-HCV был положительным у 75% пациентов с гепато-целлюлярной карциномой, у 56% — с циррозом, у 7% — в контроле.

Влияющие факторы

Ложно-положительные

•  Аутоимунные заболевания 80% случаев аутоиммунного хронического активного гепатита).
•  ИФА и RIBA — обнаруживаются также при узелковом полиартериите (~ 10%) и СКВ (~ 2%),
•  Ревматоидный фактор.
•  Гипергаммаглобулинемия.
•  Парапротеинемия.
•  Пассивная передача антител.
•  Антиидиотипы.
•  Антисупероксиддисмутаза (человеческий энзим, используемый для процессов клонирования).
•  Повторное замораживание и размораживание или длительное хранение образцов крови.

Ложно отрицательные

•  Ранняя острая инфекция.
•  Иммуносупрессия.
•  Иммунонекомпетенция.

 Повторное замораживание и размораживание или длительное хранение образцов крови.

Рекомбинантный иммуноблотный анализ (RIBA)

Применение

Подтверждение положительного ИФА в > 50% случаев; у лиц из группы высокого риска РИБА подтверждает диагноз в > 88% случаев.

Интерпретация результатов

Положительный результат RIBA указывает на гепатит в прошлом или настоящем, но не позволяет их дифференцировать.

Быстро заменяется НС V-РНК-анализом.

HCV-PHK-анализ (вирусная нагрузка) — ОТ-ПЦР

После инкубационного периода быстрое повышение ^ 108 Ед/мл. В острый период исчезают у 50% больных, никогда не появляются у 30%.

Качественные тесты

Наиболее чувствительные тесты. Нижняя граница определения щ 50 Ед/мл (100 генных РНК-копий/мл), считается позитивной или негативной для HCV-PHK.

Применение

Диагноз острой HCV-инфекции до сероконверсии; определение вируса в течение 1-2 недель после заражения.

Определение может быть интермиттирующим, один отрицательный анализ ОТ-ПЦР не является заключительным.

Мониторирование больных, получающих противовирусную терапию.

Для подтверждения первоначального качественного теста или для интерпретации RIBA.

Могут быть получены ложно-позитивные или ложно-негативные результаты.

Количественные тесты      

Нижняя граница определения 1 200 Ед/мл (500 РНК-копий/мл). Определяет концентрацию HCV-РНК. Качественные тесты разных производителей не дают идентичных результатов.

Возможны большие спонтанные отклонения в РНК; измерения следует производить 2 раза, чтобы | достоверно оценить эффект проводимой терапии.

ОТ-ПЦР положителен у 75—85% лиц с положительным тестом на анти-HCV и у > 95% лиц с острым или хроническим гепатитом С.

Более чувствительны тесты на содержание нуклеиновой кислоты HCV, позволяют определить низкий уровень HCV-PHK в сыворотке, лимфоцитах, печеночной ткани.

Можно применять для определения вероятности ответа на антивирусную терапию и для оценки этого ответа. Пациенты с уровнем < 2 млн копий/мл до лечения (ПЦР или количественная реакция bDNA), по-видимому, более чувствительны к терапии интерфероном. Положительный тест через 12 недель лечения интерфероном предполагает отсутствие эффекта терапии; отрицательный тест дает примерно 30% -ный прогноз стойкого эффекта. Отрицательный результат через 6 месяцев после начала терапии указывает на излечение в 99% случаев. Не используется для констатации времени окончания лечения.

Менее чувствителен, чем качественный тест ОТ-ПЦР.

Может применяться для диагностики хронического гепатита С с положительным анализом на антитела.

Может использоваться для диагностики острой инфекции и у иммунодефицитных пациентов с отрицательными тестами на антитела, но у которых предположительно есть HCV-инфекция.

Не используется для исключения HCV-инфекции.

Самый ранний маркер в диагностике фульминантного гепатита С. Отрицательный тест у пациентов с фульминантным гепатитом исключает наличие HCV.

Подтверждает присутствие HCV после трансплантации печени при положительных анти-HCV и нормальном уровне сывороточной АЛТ. Помогает дифференцировать реинфицирование от других случаев воспаления (например, отторжение трансплантата).

Диагноз хронического гепатита у пациентов:

с отрицательными анти-HCV;

с ложно-положительными серологическими тестами вследствие наличия аутоантител.

HCV-генотипирование

Секвенирование нуклеиновых кислот с помощью ПЦР.

Выявление с помощью ПЦР нуклеотидных последовательностей различных микроорганизмов.

По меньшей мере 6 генотипов и > 90 подтипов. Можно обнаружить корреляцию между генотипом и заболеванием. Часто развиваются смешанные инфекции.

Применение

Оценка состояния пациента до лечения. Тест не информативен у больных с низкой вирусной нагрузкой (< 1 ООО РНК-копий/мл) или вследствие смешанного генотипа.

Определение дозы лекарства, длительности лечения.

Оценка ответа на терапию.

Полезен в определении источника инфекции.

Противовирусную терапию рекомендуют пациентам с высокой степенью риска прогрессирования заболевания до стадии цирроза