Иммуноферментный анализ
Enzyme Immunoassay
Иммуноферментный анализ (ИФА) — это неизотопный иммуноанализ с использованием ферментов (наиболее часто — пероксид аза хрена), коэнзимов, ингибиторов ферментов или флуоресцирующих субстратов в качестве меток антигенов или антител. Реакция фермента, связанного с иммуносорбентом (ТИФА), — наиболее часто используемый метод ИФА.
Применение
Квантификация факторов свертывания крови, компонентов системы фибринолиза, регуляторных субстанций; можно определить аттомольные концентрации.
Серологическая диагностика инфекционных заболеваний.
Цитометрия поточная
Flow Cytometry
Цитометрия поточная — это метод распознавания и подсчета единичных клеток, помеченных флюоресцирующими моноклональными антителами или внутриклеточными антигенами, ассоциированными с клеточным происхождением (например, Т-лимфоцитарное по сравнению с В-лимфоцитарным), клеточной функцией (наличие рецепторов цитокинов или других рецепторов), степенью зрелости (например, пре-В-клетки или зрелые В-клетки).
Применение
Анализ образцов, включая перефирическую кровь, аспират костного мозга, с использованием основных видов биопсии, в том числе тонкоигольной аспирационной биопсии (ТАБ), биопсии свежей ткани и всех жидкостей организма.
Диагностика, характеристика и мониторинг злокачественных новообразований
- Дифференциальная диагностика лейкемии миелоидной от лимфоидной при острой и малодифференцированной формах.
- Диагностика иммунодефицитов путем иммунофенотипирования; прогноз.
- Диагностика пароксизмальной ночной гемоглобинурии (ПНГ).
- Контроль за эффективностью терапии.
- Определение минимальной резидуальной болезни (МРБ) в цереброспинальной жидкости или костном мозге.
Подсчет лимфоцитарных подтипов, например, CD4+ Т-клеток в качестве суррогатных маркеров прогрессирования ВИЧ-инфекции.
Использование анти-НЬF-моноклональнх антител для определения HbF (можно определить < 0,05% фетальных эритроцитов):
- более точен, чем мазок по Клейхауэру — Бетке для подсчета фетоматеринской кровопотери;
- выявление увеличения доли эритроцитов, содержащих HbF (F-клетки), при гемоглобинопатии, у некоторых пациентов с миелодисплазией.
Диагностика ПНГ, миелодисплазии и системных мастоцитозов.
Диагностика содержимого ДНК (анеуплоидия) и ДНК-синтезирующей активности опухолей (определение степени злокачественности, например, при раке груди).
Показатель апоптоза.
Определение мультилекарственной устойчивости в химиотерапии рака (например, устойчивость при чрезмерной экспрессии Р-гликопротеина и других белков).
Определение перекрестной гистосовместимости для трансплантации органов и стволовых клеток.
Для определения числа CD34+ -клеток в периферической крови или трансплантате костного мозга, что коррелирует с успехом пересадки и длительностью гематопоэтического восстановления после пересадки стволовых клеток.
Для определения клеточносвязанных антител и сортировки субпопуляций в их составе.
Подсчет ретикулоцитов (при анемиях, гиповитаминозах, для определения регенеративной активности трансплантанта костного мозга). Также метод используют для определения индекса созревания ретикулоцитов и фракции юных ретикулоцитов (контроль анемий).
Определение человеческого лейкоцитарного антигена В27 (HLA-B27).
Определение антинейтрофильных антител, связанных с гранулоцитами или расположенных свободно в плазме.
Исследование функции нейтрофилов при иммунодефиците (например, фагоцитоз, кислородный взрыв, иммунофенотипирование) и хронической гранулематозной болезни.
Митогенстимулированная оценка Т-клеток.
В трансфузионной медицине
- Определение и подсчет низкого уровня иммуноглобулинов, связанных с эритроцитами и не определяемых прямым антиглобулиновым тестом (прямая проба Кумбса) у пациентов с гемолизом.
- Определение эритроцитарного химеризма.
- Точное фенотипирование эритроцитов после многочисленных трансфузий.
- Перекрестное взаимодействие с тромбоцитами.
- Определение комбинации лейкоцитов в продуктах крови.
При трансплантации
- Трансплантация стволовых клеток: соответствие числа CD34 у доноров или реципиентов.
- Определение аллоантител к HLA (4JIA) при трансплантации органов.
Определение функциональной активности тромбоцитов, например, оценка состояния и размещения наружного рецептора в диагностике врожденных функциональных расстройств тромбоцитов (gpIIb/IIIa при тромбастении Гланцманна; gplb при болезни Бернара — Сулье), показатель тром- боцитассоциированного IgG при иммунной тромбоцитопении и др.
Исследование выживаемости эритроцитов с использованием эритроцитов, меченных биотином вместо хрома-51 (51 Сг).
Выявление внутриклеточных паразитов (Babesia, Plasmodium, Trypanosoma) с использованием РНК- и ДНК-связанных флуорохромов, которые связывают паразитов.
В микробиологии: для выявления специфических антител; определения присутствия гетерогенных популяций с разной чувствительностью к антибиотикам.
Этот метод не рекомендуется для диагностики Ходжкинской лимфомы, хронического миелобластного лейкоза или миелодиспластического синдрома, но может использоваться для мониторинга последних двух патологий.