Выделение микроорганизмов из стерильных в норме биологических субстратов имеет высокую диагностическую ценность в плане выявления микробной этиологии заболевания, а также в плане проведения дальнейшей этиотропной антибактериальной терапии и при необходимости противоэпидемических и профилактических мероприятий.
Кожные покровы и открытые раны являются сложными объектами для интерпретации результатов исследования, так как в норме не являются стерильными и густо заселены разнообразной микрофлорой. Проведение микробиологического исследования показано при наличии клинических признаков раневой инфекции и является обязательным диагностическим мероприятием. Объектом исследования являются как открытые гнойные раны, свищи, так и глубоко расположенные неоперированные гнойно-некротические поражения (абсцесс, флегмона и др.). Микробиологическое исследование проводят сразу же после выявления очага инфекции, при подозрении на него.
Материал для исследования при гнойно-воспалительных заболеваниях мягких тканей может быть получен различными путями. При открытых гнойных ранах материал отбирают стерильным тампоном, помещая его в транспортную среду. Более приемлемым, следует считать взятие для исследования биоптата, имеющего признаки гнойного воспаления. В случае закрытых гнойных процессов получают материал путем пункции гнойного очага или аспирации экссудата толстой иглой. При глубоких очагах инфекции неоценимую помощь оказывает УЗИ как в плане диагностики заболевания, так и для получения материала путем прицельной пункции для микробиологического исследования. При наличии обширных гнойных ран, имеющих различные патоморфологические изменения, образцы материала берут из нескольких участков.
Полученный материал, помещенный в стерильную пробирку, специальную транспортную среду или в шприце с закрытой иглой, желательно как можно быстрее доставить в бактериологическую лабораторию. Его сопровождают сведениями о больном и характере заболевания на специальном бланке.
Из каждого поступающего в лабораторию образца готовят мазок, которь окрашивают по Граму. Его микроскопируют, отмечая наличие и количество пол морфно-ядерных гранулоцитов и других клеток крови, количество и морфологи бактериальных клеток (кокки, палочки и др.) с указанием их окраски по Ipa.
Бактериоскопия мазка является чрезвычайно ценным методом исследования, который в течение короткого времени (до 1 ч) позволяет дать предварительные сведения о характере имеющейся микрофлоры в очаге инфекции. В некоторых случаях при выявлении характерной морфологии бактерий возможна родовая диагностика инфекции. Например, при обнаружении крупных грамположительных палочек с обрубленными концами можно с большой долей вероятности говорить о клостридиальной природе инфекционного поражения. Данные микроскопии служат ориентиром для назначения адекватной стартовой антибактериальной терапии.
Полученный клинический материал засевают на соответствующие питательные среды, проводят идентификацию бактерий с определением их родовой и видовой принадлежности. Само по себе обнаружение бактерий в ране не является подтверждением раневой инфекции. Данные бактериологического исследования всегда необходимо сопоставлять с клинической картиной заболевания. Этиологическая роль некоторых микроорганизмов в развитии инфекционного процесса может быть несущественна в результате простой колонизации раны данными бактериями.
При выделении ассоциации бактерий ведущее значение в течение гнойно-воспалительного процесса отдают более высоковирулентным видам, а при сходной степени вирулентности приоритетными признают виды, количественно преобладающие в ассоциации.
Открытые раны обычно очень быстро колонизируют внутрибольничные штаммы бактерий. У больных с системной воспалительной реакцией необходимо проводить неоднократные посевы крови.
До настоящего времени клиническая картина заболевания является основным методом диагностики анаэробной инфекции. Однако только микробиологическая диагностика с идентификацией возбудителя способна дать ответ об участии в патологическом процессе анаэробов. Между тем отрицательный ответ бактериологической лаборатории ни в коем случае не отвергает возможность участия анаэробов в развитии болезни, так как, по некоторым данным, около 50% анаэробов являются некультивируемыми.
Для диагностики анаэробной инфекции существуют современные высокоточные методы индикации. К ним в первую очередь относятся газожидкостная хроматография (ГЖХ) и масс-спектрометрия, основанные на регистрации и количественном определении метаболитов и летучих жирных кислот. Данные этих методов коррелируют с результатами бактериологической диагностики в 72%. Чувствительность ГЖХ составляет 91-97%, специфичность — 60-85%. К другим перспективным методам выделения возбудителей-анаэробов, в том числе из крови, относятся системы Lachema, Bactec, Isolator, окраска препаратов для обнаружения бактерий или их антигенов в крови акридиновым желтым, иммуноэлектрофорез, иммуноферментный анализ и другие.