Лабораторные тесты для отбора новорожденных

Определение пола (половой хроматин; тельца Барра)

Nuclear Sexing (Sex Chromatin; Barr Bodies)

Определение пола проводят микроскопией ядер клеток, взятых со слизистой внутренней поверх­ности щеки или шейки влагалища. Затем мазок окрашивают основным красителем. Инактиви­рованная хромосома X (половой хроматин, или тельце Барра) на внутренней ядерной мембране присутствует в 30—60% соматических клеток женщин. Максимальное количество телец Барра всегда на одно меньше, чем количество Х-хромосом.

Этот метод часто заменяет полный хромосомный анализ. Однако нормальный результат не исклю­чает хромосомных аномалий.

Если у пациентов с женскими гениталиями меньше 10% соматических клеток содержат тельца Бар­ра, то необходимо кариотипирование для исключения хромосомных аномалий.

Отсутствие телец Барра:

•  нормальные мужчины;
•  синдром Тернера.

Два тельца Барра могут быть у лиц со следующим генотипом:

•  47 XXX женщина;
•  48 XXXY мужчина (синдром Клинефельтера);
•  49 XXXYY мужчина (синдром Клинефельтера).

Три тельца Барра могут присутствовать:

•  49 XXXXY мужчина (синдром Клинефельтера).

У нормальных женщин в пуле лейкоцитов 2-3% имеют дополнительный половый хроматин, пред­ставленный в виде двух Х-хромосом в кариотипе. У мужчин этого нет. При синдроме Клинефель­тера ввиду наличия дополнительного полового хроматина снижается частота нарушений в нем (средняя доля таких нейтрофилов уменьшается).

При трисомии 21 среднее количество нарушений в половом хроматине также снижено.

Удвоенный половой хроматин встречается крайне редко и не учитывается при диагностике.

Анализ хромосом (кариотип)

Chromosome Analysis (Karyotyping)

В ядре каждой клетки человека содержится полный геном в виде 6 миллиардов пар оснований ДНК, упакованных в 46 хромосом; из них 22 пары соматических хромосом (аутосом) и одна па­ра половых хромосом (XX у женщин, XYу мужчин). Мутаций у живых детей выявляют в < 1% случаев, в < 50% случаях — при мертворождениях.

Применение

Синдромы, связанные с аутосомами:

трисомия 21 (синдром Дауна), трисомия 18, трисомия 13.

Синдромы, связанные с половыми хромосомами:

синдром Клинефельтера — XXY, XXXY;

синдром Тернера — ХО;

«суперженщина» — XXX, ХХХХ;

«супермужчина» — XYY;

синдром «смешная малышка» обусловлен множественными генетическими аномалиями, ум­ственной отсталостью и низким весом при рождении.

Возможен хронический миелолейкоз представленный филадельфийской хромосомой.

Гермафродитизм.

Бесплодие (некоторые больные).

Повторные выкидыши.

Первичная аменорея и олигоменорея.

Умственная отсталость и сексуальные аномалии.

Гипогонадизм.

Задержка полового созревания или аномалии в период полового созревания.

Нарушения роста и веса.

Отбор новорожденных

Newborn Screening

Применение

Генетические тесты доступны для определения > 940 заболеваний, из которых примерно 400 можно выявить только этими исследованиями.

Наиболее распространенный метод — параллельная масс-спектрометрия (MS/MS), выявляющая > 50 расстройств.

Определить содержание в крови следующих аминокислот: глицин, аланин, гистидин, глутамин (и глутаминовая кислота), аргинин и орнитин.

Также можно выявить карнитин, ацилкарнитин, жирные кислоты, метилмалоновую кислота, про- пионовую кислоту, различные аномалии кобаламина и дефицит витамина В12.

Существенно исследование метаболитов по определенным группам (по шаблону), а не только по от­дельности. В идеале отбор должен выявить бессимптомные пока расстройства, которые в буду­щем могут привести к необратимым повреждениям, и расстройства, для лечения которых есть эффективные методы.

Достаточен для ограничения распространения ложно-положительных и ложно-отрицательных ре­зультатов.

Высокий показатель соотношения цена/польза.

Метод адекватен для назначения надлежащего лечения.

Отбор новорожденных: расстройства и заболеваемость

Особенности лабораторных тестов новорожденных и детей на метаболические расстройства

Some Laboratory Clues to Metabolic Diseases in Infants and Children

Расстройства обмена веществ часто ассоциируют с определенными лабораторными признаками; в связи с этим врачи должны быть осторожены при отборе пациентов.

Гипогликемия

•  Галактоземия.
•  Гликогеновые болезни (IA, IB, III, VI, IX А, В, С).
•  Врожденная непереносимость фруктозы.
• Ацидемия органических аминокислот (например, болезнь «кленового сиропа», пропионовая, ме- тилмалоновая, изовалерьяновая, глутаровая ацидемия и др.).
•  Тирозинемия.
•  Дефицит биотинидазы.
•  Эндокринные болезни (например, надпочечниковая недостаточность, диабет матери, недостаточ­ность гипофиза).
•  Другие (например, синдром Рейе, сепсис, болезни печени, наркомания).

Ацидоз

•  Гипервалинемия.
•  Гиперлейцин-изолейцинемия.

Расстройства обмена аминокислот

•  Изовалериановая ацидемия.
•  Пропионовая ацидемия.
•  Метилмалоновая ацидемия.
•  Глутаровая ацидемия.
•  Дефицит общей карбоксилазы.
•  2-метил-З-гидроксимасляная ацидемия.
•  Дефицит ацил-Ко А- дегидрогеназы.

Болезни накопления гликогена

•  Тип Iа.
•  Тип III.

Гипераммониемия

(Может сопутствовать задержке развития, низкому весу при рождении, сильному запаху пота, ги- поальбуминемии и дефициту кальция и др.) (Гипераммониемия изначально встречается при тяжелых необъяснимых дефектах нервной системы новорожденных или у пациентов с необъ­яснимыми эпизодами сонливости и рвоты.) Аммониемия появляется при нарушении обмена мо­чевины и может быть без ацидоза. Степень поражения аммониемией исследуется методами высо­коэффективной жидкостной хроматографии и масс-спектрометрии.

Дефекты обмена мочевины: тяжелая аммониемия с респираторным алкалозом

•  Дефицит аргининсукцинатсинтетазы.
•  Дефицит аргининсукцинатлиазы.
•  Дефицит аргиназы.
•  Дефицит орнитинтранскарбамилазы.
•  Дефицит N-ацетилглутаматсинтетазы.
• Дефицит карбамилфосфатсинтетазы.

Дефекты обмена органических кислот: аммониемия легкой и умеренной степени (Ч 500 мг/дл)

•  Метилмалоновая ацидемия.
•  Изовалерьяновая ацидемия.
• Дефицит карбоксилазы.
• Пропионовая ацидемия.
•  Глутаровая ацидемия типа I и II.
• Дефицит кетотиолазы.

Нарушение транспорта двухосновных аминокислот (например, гиперорнитинемия)

Дефекты окисления жирных кислот Преходящая гипераммониемия новорожденных Синдром Рейе

Печеночная недостаточность

Лекарства (например, вальпроевая кислота)

Повышение в сыворотке крови непрямого билирубина

•  Обменные нарушения в эритроцитах плода
•  Синдром Криглера — Найяра.
•  Синдром Жильбера.
•  Гипотиреоз.

Повышение в сыворотке крови прямого билирубина

•  Синдром Ротора.
•  синдром Дубина — Джонсона.
•  Галактоземия.
•  Врожденная непереносимость фруктозы.
•  Дефицит а1-антитрипсина.

Гепатомегалия может сопровождать

•  Лизосомальные болезни (например, мукополисахаридоз, муколипидоз, болезни накопления гли­копротеинов, ганглиозидоз).
•  Липидозы (например, болезни Гоше, Волмана, Неймана — Пика).
•  Дефекты обмена углеводов (например, галактоземия, гликогеновые болезни, непереносимость фруктозы).
•  Тирозинемия.
•  Дефицит а1-антитрипсина.

Затруднения при кормлении или рвота вследствие болезней обмена веществ, но наиболее важны

•  Нарушение метаболизма аминокислот (например, аммониемия или органических кислот аци- демии).
•  Непереносимость углеводов (например, фруктозы).
•  Адреногенитальный синдром.

Судороги

•  Болезни накопления гликогена (гипогликемия).
•  Галактоземия.
•  Непереносимость фруктозы.
•  Болезнь кленового сиропа.
•  Врожденный лактатацидоз.
•  Рахит, нечувствительный к витамину D.
•  Ацидемия органических кислот.
•  Нарушение обмена мочевины.
•  Гипергликемия.
•  Дефицит пиридоксина.