Влияние малопоточной мембранной оксигенации крови на параметры клеточного, гуморального и неспецифического иммунитета

Среди различных методов ЭКД, таких как гемо-, лимфо- и плазмосорбции, плаз­маферез, гемофильтрация, самостоятельно оказывающих иммунокорригирую­щий эффект различной направленности и степени выраженности, ММОК пока не нашла широкого применения. Клиницисты используют ММОК в сочетании с указанными способами ЭКД, достигая значительно большего детоксикационно- го и иммунокорригирующего эффекта, чем при применении этих методов изоли­рованно, без ММОК. По мнению некоторых исследователей, гемоксигенация как

таковая не оказывает иммунокорригирующего действия. Однако мы предполага­ем, что, помимо основного специфического эффекта, оказываемого ММОК на кислородтранспортную функцию крови и ее реологические свойства, определяю­щие показания к ее использованию при экстракорпоральных детоксикационных мероприятиях, мембранная оксигенация также воздействует на гомеостаз в це­лом, затрагивая клеточные и гуморальные факторы иммунитета, что и вносит свой вклад в потенцирование достигаемых результатов.

В связи с этим мы поставили задачу определить диапазон и глубину воздейст­вия изолированной ММОК на систему иммунитета у больных с гнойно-септиче­скими заболеваниями органов брюшной полости, протекающими на фоне раз­вившегося вторичного иммунодефицита. Предварительно нами была проведена серия стендовых опытов с использованием донорской крови различных сроков хранения: 24, 72, 120—144 ч.

Хорошо известно, что с момента эксфузии клеточные элементы крови пре­терпевают ряд изменений и по мере удлинения сроков ее хранения они становят­ся более выраженными. Особенно наглядно это проявляется в снижении функ­циональной активности лейкоцитов (лимфоцитов и фагоцитирующих клеток) вследствие быстро нарастающего в них угнетения процессов метаболизма. Об­менные процессы в клетках приводят к изменению качества крови, снижению ее биологической ценности, что нашло подтверждение во многих исследованиях. Приведем результаты опытов по оксигенированию донорской крови, хранившейся 72 ч при температуре 4 °С.

В работе использовался малопоточный мембранный оксигенатор «МОСТ 18-01». Процесс оксигенации осуществляли в экстракорпоральном контуре в течение 10 мин. Объем заготовленной на консерванте «Глюгицир» крови для проведения одного опыта — 400 мл, скорость кровотока в контуре — 90—110 мл/мин. В экспе­риментах использовали кровь здоровых доноров в возрасте от 20 до 45 лет.

Состояние клеточных и гуморальных факторов иммунитета оценивали непо­средственно перед оксигенацией, сразу после нее и на следующие сутки. Опреде­ление иммунологического профиля проводили общепринятыми методами спон­танного розеткообразования с использованием ксеногенных эритроцитов. При этом определяли общую и активную популяции Т-лимфоцитов (Е-РОК общие, Е-РОК активные), количество В-лимфоцитов (Ем-РОК) в процентном и абсо­лютном выражении. Активность рецепторного аппарата мембран иммунокомпе- тентных клеток определяли вычислением морфологического показателя аффинно­сти (МПА). С этой целью в каждом мазке подсчитывали 100 лимфоцитов с раз­личным количеством фиксированных на мембране эритроцитов. В 0-ю группу относили свободные лимфоциты, в 1-ю — лимфоциты с 3—5 эритроцитами в ро­зетке, во 2-ю — лимфоциты, присоединившие более 5 эритроцитов, в 3-ю — пол­ные розетки. Порядковый номер группы умножали на число составляющих ее лимфоцитов. Результат произведений этих групп суммировали и сумму делили на 100. Полученная величина и составила МПА. Лимфоциты выделяли на градиенте плотности 1,077 г/мл.

Методом прижизненной компьютерной фазовой морфометрии на микроско­пе «Цитоскан» с использованием оригинальной программы статистической обра­ботки данных определяли ряд геометрических параметров клетки (максималь­ный и минимальный диаметр, периметр, высоту, площадь и объем). Кроме того, в пробах определяли содержание иммуноглобулинов классов А, М, G и компо­нентов комплемента методом радиальной иммунодиффузии по Манчини; ЦИК с 3 и 4% ПЭГ-6000 по Э. Гашковой.

* р < 0,05 по сравнению с исходными значениями

Нами было установлено, что донорская кровь, хранившаяся в течение 3 сут при температуре 4 °С, в значительной мере утрачивает функциональную актив­ность иммунокомпетентных и фагоцитирующих клеток, что проявилось в сниже­нии количества общих и активных Т-лимфоцитов, уменьшении степени экспрес­сии и плотности распределения на мембране Е-рецептора (С02-рецептор). Фаго­цитарная активность нейтрофилов также была снижена по сравнению с нормой (табл. 14.7).

Существенно измененными были и фазовые морфометрические характери­стики клеток.

После проведения 10-минутной оксигенации и последующего анализа изу­чаемых параметров нами выявлено их существенное улучшение (см. табл. 14.7).

При этом увеличение значений всех параметров было статистически досто­верным. Интересно отметить, что фазовые морфометрические характеристики также существенно изменились в сторону приближения к контрольным значениям.

Исследования проводили с использованием культуральной среды «Игла».

Структурно-метаболические особенности мононуклеаров периферической крови после ММОК нашли отражение в характерном изменении 3-мерного фа­зового изображения клеток.

При исследовании гуморального звена не было зафиксировано существен­ных изменений значений до и после оксигенации. Таким образом, проведенные стендовые опыты на донорской крови показали, что, помимо известных и доста­точно хорошо изученных эффектов по улучшению кислородтранспортной функ­ции и реологии крови, ММОК оказывает и стимулирующее воздействие на иммунокомпетентные клетки. Так, увеличивается число общих Е-РОК, восста­навливается число активных Е-РОК (в процентном выражении), повышается экспрессия и плотность функционально активных Е-рецепторов лимфоцитов, стимулируется процесс фагоцитоза и окислительно-восстановительный метабо­лизм в нейтрофилах, в большой степени восстанавливаются морфометрические параметры клетки, приближаясь к норме.